CTXTNA2 細胞株復蘇失敗原因分析
慧穎生物熱賣，細胞株狀態(tài)良好，飽滿，光澤度好，活力強，傳代次數(shù)少，*！
產品名稱：CTXTNA2 細胞
中文名稱：大鼠星形膠質細胞
種屬：大鼠
來源：星形膠質細胞；SV40轉化；SD
培養(yǎng)條件：DMEM
生長狀態(tài)：貼壁
CTXTNA2 細胞株復蘇失敗原因分析
細胞的凍存與復蘇
為了防止因污染或技術原因使長期培養(yǎng)功虧一簣，考慮到培養(yǎng)細胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異，有時因寄贈、交換和購買，培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室，*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要?，F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(－70℃~－196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是：在－70℃以下時，細胞內的酶活性均己停止，即代謝處于*停止狀態(tài)，故可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內，水晶呈針狀，極易招致細胞的嚴重損傷。
一、細胞的凍存：為避免污染造成的損失，zui小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。
有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：
包含10％甘油的*培養(yǎng)基，
包含10％二甲基亞砜（DMSO）的*培養(yǎng)基，
50％ 細胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％甘油的新鮮培養(yǎng)基，或
50％ 細胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。
對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：
50％ 細胞條件無血清培養(yǎng)基和50％包含有7.5％二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基，或
包含有7.5％二甲基亞砜和10％細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。CTXTNA2 細胞株復蘇失敗原因分析
SW1990 人胰腺癌細胞 人 胰腺癌；男性 L15 貼壁
RPMI8226 人多發(fā)性骨髓瘤細胞 人 骨髓瘤；男性 1640 懸浮
HMrSV5 人腹膜間皮細胞 人 腹膜間皮細胞 1640 貼壁
MEG-01 人成巨核細胞白血病細胞 人 慢性髓細胞性白血??；男性 1640 懸浮
CCD-18Co 正常人結腸成纖維細胞 人 結腸；成纖維細胞；女性 EMEM 貼壁
KGN 人卵巢顆粒細胞 人 卵巢；顆粒細胞；女性 DMEM 貼壁
HCC70 人乳腺導管癌細胞 人 乳腺導管癌；女性 DMEM 貼壁
C3A 人肝母細胞癌細胞 人 肝母細胞癌；男性 IMDM 貼壁
QBC939 人膽管癌細胞 人 膽管癌 1640 貼壁
Leydig 豬睪丸間質細胞 豬 睪丸；間質細胞 DMEM 貼壁
BPH-1 人前列腺增生細胞 人 良性前列腺增生；男性 1640 貼壁
WML2 小鼠肺成纖維細胞 小鼠 肺；成纖維細胞 DMEM 貼壁
Hs578Bst 人正常乳腺細胞 人 乳腺細胞 1640 貼壁
HCASMC 人冠狀動脈平滑肌細胞 人 冠狀動脈平滑肌 DMEM 貼壁
HSC-3 人口腔鱗癌細胞 人 舌鱗癌；男性 EMEM 貼壁
CA9-22 人口腔上皮癌細胞 人 牙齦鱗癌；男性 DMEM 貼壁
MHCC97H 人高轉移性肝癌細胞 人 肝癌；高轉移；男性 EMEM 貼壁
SSP-25 人肝膽管癌細胞 人 肝內膽管癌；女性 DMEM 貼壁
JeKo-1 人套細胞淋巴瘤細胞 人 套細胞淋巴瘤；女性 1640 懸浮
MCF-10A 人正常乳腺上皮細胞 人 乳腺；上皮細胞；自發(fā)永生；男性 1640 貼壁
BeWo 人胎盤絨毛癌細胞 人 妊娠性絨癌 EMEM 貼壁
MOVAS 小鼠主動脈平滑肌細胞 小鼠 主動脈平滑??；SV40轉化；C57BL/6 DMEM 貼壁
MA-104 猴胎腎細胞 猴 胚腎；自發(fā)永生 DMEM 貼壁
LAD2 人肥大細胞 人 肥大細胞 1640 懸浮
HMC-1 人肥大細胞 人 肥大細胞 IMDM 懸浮
NCI-H1299 人非小細胞肺癌細胞 人 大細胞肺癌；淋巴結轉移；男性 1640 貼壁
IPEC-J2 豬小腸上皮細胞 豬 小腸；上皮細胞；自發(fā)永生 1640 貼壁
MARC-145 猴胚胎腎上皮細胞 猴 胚腎；自發(fā)永生 DMEM 貼壁
凍存細胞的復蘇:凍存細胞較脆弱，要輕柔操作。凍存細胞要快速融化，并直接加入*生長培養(yǎng)基中。若細胞對凍存劑（DMSO或甘油）敏感，離心去除凍存培養(yǎng)基，然后加入*生長培養(yǎng)基中。
1、直接鋪板方法
取出貯存細胞，37℃水浴中快速融化。
直接用*生長培養(yǎng)基鋪板細胞。1ml凍存細胞使用10~20ml*生長培養(yǎng)基。進行活細胞計數(shù)，細胞接種應該至少在3×105活細胞/ml。培養(yǎng)細胞12到24小時，更換新鮮的*生長培養(yǎng)基，去除凍存劑。
2、離心方法
取出貯存細胞，37℃水浴中快速融化。
把1到2ml凍存細胞加入到大約25ml*生長培養(yǎng)基，輕輕混勻。
以大約80x g離心2到3分鐘。
棄去上清。
在*生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細胞，并且進行活細胞計數(shù)。
細胞鋪板，細胞接種應該至少為3×105活細胞/ml。
三、細胞的分化、衰老與死亡
1、細胞的分化:一個成年人全身細胞總數(shù)約1012個，可以區(qū)分為200多種不同類型的細胞：形態(tài)結構，代謝，行為，功能等各不相同。追根溯源，這么多種細胞均來自一個受精卵細胞。所以，通常把發(fā)育過程中，細胞后代在形態(tài)、結構和功能上發(fā)生差異的過程稱為細胞分化。細胞分化發(fā)生在胚胎階段，也發(fā)生在胎兒出生以后，乃至成人階段。例如，人體血細胞的產生和分化，這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。
由旺盛生長不斷分裂的細胞，轉入分化，通常從細胞周期中G1期開始時一個確定的點G0點“逃逸”出細胞周期。旺盛生長分裂的細胞和各種分化了的細胞，它們的基因表達和代謝活動各不相同。
2、細胞的衰老:體外細胞培養(yǎng)實驗證明：
成纖維細胞：來自胎兒傳代50次后衰老死亡,來自成人傳代20次后衰老死亡(與具體年齡有關);來自小鼠傳代14--28次后衰老死亡,來自烏龜傳代90--125次后衰老死亡。
細胞衰老過程中會發(fā)生一系列的變化，包括：蛋白質合成速度降低，已有蛋白質結構變化，特異蛋白質成份出現(xiàn)；同時，細胞核，線粒體，膜系統(tǒng)、骨架系統(tǒng)等都有結構、功能的改變。
細胞衰老原因，尚無定論，出現(xiàn)過好幾種理論與假說，其中得到較廣泛認可的是“自由基損傷假說”。
3、細胞凋亡:細胞的死亡是個體存活的正常現(xiàn)象，常見的細胞死亡形式有3種：壞死、凋亡和細胞毒性。多細胞生物的生命活動中，因為環(huán)境因素的突然變化或病原物的入侵，導致一部分細胞死，稱為細胞的病理死亡，或細胞壞死。壞死是細胞暴露于嚴重的物理或化學刺激時導致的細胞死亡；細胞毒性是由細胞或者化學物質引起的單純的細胞殺傷事件，不依賴于其它兩種細胞死亡機理，如殺傷T細胞的細胞毒性作用。
CTXTNA2 細胞株復蘇失敗原因分析